ПРИ ПОДДЕРЖКЕ
КАФЕДРЫ ЭНДОДОНТИИ
ПЕНСИЛЬВАНСКОГО УНИВЕРСИТЕТА
КАФЕДРЫ ЭНДОДОНТИИ
ПЕНСИЛЬВАНСКОГО УНИВЕРСИТЕТА
Заказать звонок
Зарегистрируйтесь прямо сейчас
Воздействие консервативных эндодонтических доступов на дезинфекцию и формирование корневых каналов
Введение:
Влияние малоинвазивных эндодонтических процедур на дезинфекцию корневых каналов не определено. В этом исследовании ex vivo сравнивалась дезинфекция и формирование корневых каналов в зубах с консервативным или традиционным эндодонтическим доступом.
Влияние малоинвазивных эндодонтических процедур на дезинфекцию корневых каналов не определено. В этом исследовании ex vivo сравнивалась дезинфекция и формирование корневых каналов в зубах с консервативным или традиционным эндодонтическим доступом.
Результаты:
Все исходные образцы были положительными на E. faecalis. После подготовки количество бактериально-положительных образцов было значительно выше в группе с консервативным доступом (25/29, 86%), чем в группе с традиционным доступом (14/28, 50%) (Р < 0,01). Межгрупповое количественное сравнение показало, что снижение количества бактерий также было значительно выше в группе обычных кариозных полостей (Р < 0,01). Данные микро-компьютерной томографии не выявили существенной разницы в количестве необработанных участков между группами.
Все исходные образцы были положительными на E. faecalis. После подготовки количество бактериально-положительных образцов было значительно выше в группе с консервативным доступом (25/29, 86%), чем в группе с традиционным доступом (14/28, 50%) (Р < 0,01). Межгрупповое количественное сравнение показало, что снижение количества бактерий также было значительно выше в группе обычных кариозных полостей (Р < 0,01). Данные микро-компьютерной томографии не выявили существенной разницы в количестве необработанных участков между группами.
Выводы:
Наши результаты показали, что, хотя формирование с использованием машинного инструмента было одинаковым в разных группах, дезинфекция была значительно нарушена после препарирования корневых каналов зубов с консервативным эндодонтическим доступом (J Endod 2020;46:655−661).
Наши результаты показали, что, хотя формирование с использованием машинного инструмента было одинаковым в разных группах, дезинфекция была значительно нарушена после препарирования корневых каналов зубов с консервативным эндодонтическим доступом (J Endod 2020;46:655−661).
Методы:
Нижнечелюстные резцы с овальными корневыми каналами были отобраны и анатомически подобраны на основе микрокомпьютерного томографического (микро-КТ) анализа и распределены на 2 группы. Были подготовлены полости консервативного и традиционного доступа, корневые каналы были инфицированы Enterococcus faecalis в течение 30 дней. Подготовка корневых каналов в обеих группах проводилась с использованием инструмента XP-endo Shaper (FKG Dentaire, Ла-Шо-де-Фон, Швейцария) и медикаментозной обработкой 2,5% гипохлоритом натрия. Для оценки формы использовались микро-КТ-снимки, сделанные до и после подготовки. Бактериологические данные анализировали с помощью регрессионной модели Пуассона и критерия хи-квадрат с поправкой Йейтса. Данные микро-КТ анализировали с помощью t-тестов Уилкоксона, Манна-Уитни и Стьюдента с уровнем значимости, установленным на уровне 5%.
Нижнечелюстные резцы с овальными корневыми каналами были отобраны и анатомически подобраны на основе микрокомпьютерного томографического (микро-КТ) анализа и распределены на 2 группы. Были подготовлены полости консервативного и традиционного доступа, корневые каналы были инфицированы Enterococcus faecalis в течение 30 дней. Подготовка корневых каналов в обеих группах проводилась с использованием инструмента XP-endo Shaper (FKG Dentaire, Ла-Шо-де-Фон, Швейцария) и медикаментозной обработкой 2,5% гипохлоритом натрия. Для оценки формы использовались микро-КТ-снимки, сделанные до и после подготовки. Бактериологические данные анализировали с помощью регрессионной модели Пуассона и критерия хи-квадрат с поправкой Йейтса. Данные микро-КТ анализировали с помощью t-тестов Уилкоксона, Манна-Уитни и Стьюдента с уровнем значимости, установленным на уровне 5%.
Важным аспектом MIE является размер и дизайн полостей эндодонтического доступа. Консервативный доступ рекомендуются для сохранения структуры твердых тканей и снижения риска перелома и потери зуба после лечения корневых каналов. На момент написания этой статьи нет исследования, которое бы оценило влияние консервативного эндодонтического доступа на дезинфекцию корневых каналов. Потому что элиминация внутриканальных бактерий до уровней, совместимых с перирадикулярной тканью, имеет первостепенное значение для заживления при лечении корневых каналов.
Успех, обсуждение и принятие подходов MIE не должны продвигаться без знания, что данный подход будет существенно влиять на прогноз эндодонтического лечения. Целью этого исследования ex vivo была оценка влияния малоинвазивных эндодонтических подходов на дезинфекцию и придание формы овальным каналам нижнечелюстных резцов. Уменьшение количества бактерий оценивали с помощью количественного анализа полимеразной цепной реакции в реальном времени (PCR), а эффекты формирования оценивали с помощью микрокомпьютерного томографического (микро-КТ) анализа.
Недавно была введена концепция минимально инвазивной эндодонтии (MIE), основной целью которой является обеспечение минимальных изменений в твердых тканях зуба во время лечения корневых каналов, чтобы улучшить долгосрочную выживаемость и функцию пролеченных зубов. MIE — это естественная производная от минимально инвазивной стоматологии, которая, как утверждается, включает подходы к профилактике или лечению заболеваний с минимальной потерей исходной ткани.
Важно:
Сохранение твердых тканей во время лечения корневых каналов является логичной целью предотвращения разрушения и потери зуба. В этом контексте была предложена подготовка полостей консервативного эндодонтического доступа. Хотя формирование овальных каналов с помощью машинных инструментов существенно не отличалось между группами, дезинфекция была намного лучше в зубах с традиционным доступом, чем в зубах с консервативным доступом.
Сохранение твердых тканей во время лечения корневых каналов является логичной целью предотвращения разрушения и потери зуба. В этом контексте была предложена подготовка полостей консервативного эндодонтического доступа. Хотя формирование овальных каналов с помощью машинных инструментов существенно не отличалось между группами, дезинфекция была намного лучше в зубах с традиционным доступом, чем в зубах с консервативным доступом.
Поскольку апикальный периодонтит является воспалительным заболеванием, вызываемым бактериями, которые колонизируют систему корневых каналов, успешное лечение корневых каналов зависит от эффективного инфекционного контроля. Начальным и очень важным этапом лечения корневых каналов является подготовка полости коронарного доступа с подходящей конструкцией и размером, позволяющей обнаружить все корневые каналы, снижая риск пропуска каналов, которые могут поставить под угрозу результат лечения и повысить эффективность инструментальной обработки корневых каналов, устраняя анатомические вмешательства в корневых каналах и предотвращая интраоперационные ятрогенные осложнения, такие как образование ступеньки и отлом инструмента.
Материалы и методы
Отбор образцов и подготовка.
Размер выборки был рассчитан с использованием программного обеспечения G*Power 3.1 (Университет Генриха Гейне, Дюссельдорф, Германия) с погрешностью альфа-типа 0,05 и степенью 95%, что показало, что для бактериологического анализа требовалось по меньшей мере 22 зуба на группу и 12 для микро-КТ-анализа.
В каждой группе было использовано по тридцать зубов, учитывая риск использования образцов во время эксперимента и для усиления статистического анализа. Шестьдесят два нижнечелюстных резца с длинными овальными корневыми каналами были отобраны из 250 резцов, удаленных по причинам, не связанным с этим исследованием.
Зубы были анатомически подобраны попарно и случайным образом распределены на 2 группы. Два зуба использовались в качестве контроля загрязнения.
Размер выборки был рассчитан с использованием программного обеспечения G*Power 3.1 (Университет Генриха Гейне, Дюссельдорф, Германия) с погрешностью альфа-типа 0,05 и степенью 95%, что показало, что для бактериологического анализа требовалось по меньшей мере 22 зуба на группу и 12 для микро-КТ-анализа.
В каждой группе было использовано по тридцать зубов, учитывая риск использования образцов во время эксперимента и для усиления статистического анализа. Шестьдесят два нижнечелюстных резца с длинными овальными корневыми каналами были отобраны из 250 резцов, удаленных по причинам, не связанным с этим исследованием.
Зубы были анатомически подобраны попарно и случайным образом распределены на 2 группы. Два зуба использовались в качестве контроля загрязнения.
Критерий включения был следующим: зубы с единственным каналом овальной формы на расстоянии 3 мм от вершины, основанным на букколингвальной и мезиодистальной рентгенографических проекциях и дополнительно подтвержденным микро-компьютерной томографией. Чтобы канал считался овальной формы, он должен был иметь букколингвальное расстояние, по крайней мере, в два раза большее, чем мезиодистальное расстояние. Кроме того, выбранные зубы имели неповрежденные коронки (без кариеса и реставраций), полностью сформированные корни и отсутствие значительных кальцинатов или дефектов внутренней резорбции.
Микро-КТ Анализ
Морфометрическую оценку корневого канала проводили с помощью микро-КТ визуализации. Устройство SkyScan 1174v2 (Bruker-microCT, Контич, Бельгия) использовалось при изотропном разрешении 23,14 мм, 70 кВ и 800 мА. Сканирование выполнялось путем поворота на 180 градусов вокруг вертикальной оси с шагом поворота 1,0 с использованием алюминиевого фильтра толщиной 0,5 мм. Целями микро-компьютерной томографии были оценка анатомии корневого канала для отбора образцов, стандартизация распределения между группами путем сопоставления зубов по объему и анатомическому сходству, планирование подготовки полости доступа, а также анализ и количественная оценка подготовленных участков поверхности канала.
Изображения каждого образца были восстановлены с помощью специального программного обеспечения (NRecon v.1.6.3, Bruker-microCT), обеспечивающего осевые поперечные сечения образцов.
Изображения были сегментированы с помощью программного обеспечения CTAn v.1.12 (Bruker-microCT), а реконструкция трехмерных моделей была выполнена с использованием программного обеспечения Ctvol v.2.2.1 (Bruker-microCT).
Программное обеспечение ImageJ 1.50d (Национальный институт здравоохранения, Бетесда, Мэриленд) использовалось для расчета площади поверхности (мм2) и объем (мм3) канала по всей длине канала (от рабочей длины до 10 мм короче) и в апикальном сегменте (от рабочей длины до 4 мм короче). То же программное обеспечение использовалось для оценки количества неподготовленных поверхностей корневых каналов путем вычисления количества статических вокселей, которое выражалось в процентах от общего количества вокселей на поверхности канала.
Подготовка контрактного
Микро-КТ-изображения полости доступа использовались для планирования препарирования сокращенных полостей доступа, которые состояли из небольшой круглой полости как можно ближе к режущему краю, с сохранением структуры твердых тканей в области цервикального дентина Для этого микро-КТ-изображения режущего края накладывали на изображение пульповой камеры, и расстояние от последней до мезиального и дистального аспектов измеряли с использованием ImageJ 1.50d.
Эти измерения были перенесены на режущий край образца зуба с помощью цифрового штангенциркуля ((Закаленный из нержавеющей стали; Too Xem, Нивелль, Бельгия) и помечены пилотной ручкой с тонким кончиком.
Для облегчения обработки зубы устанавливали вертикально до пришеечной области с заворачиванием корня в смоченную марлю в тиски на всех этапах лечения корневых каналов. Полости минимально инвазивного доступа были подготовлены под увеличением с помощью операционного микроскопа (DF Vasconcellos, Валенса, RJ, Бразилия) с использованием круглых 1012 HL боров (KG Sorensen, Сан-Паулу, SP, Бразилия) на высокой скорости. В другой группе полости доступа были подготовлены в соответствии с общепринятыми рекомендациями по размеру и контуру с использованием круглых боров 1014 HL и Endo-Z (Dentsply Maillefer, Ballaigues, Швейцария) на высокой скорости под операционным микроскопом.
Морфометрическую оценку корневого канала проводили с помощью микро-КТ визуализации. Устройство SkyScan 1174v2 (Bruker-microCT, Контич, Бельгия) использовалось при изотропном разрешении 23,14 мм, 70 кВ и 800 мА. Сканирование выполнялось путем поворота на 180 градусов вокруг вертикальной оси с шагом поворота 1,0 с использованием алюминиевого фильтра толщиной 0,5 мм. Целями микро-компьютерной томографии были оценка анатомии корневого канала для отбора образцов, стандартизация распределения между группами путем сопоставления зубов по объему и анатомическому сходству, планирование подготовки полости доступа, а также анализ и количественная оценка подготовленных участков поверхности канала.
Изображения каждого образца были восстановлены с помощью специального программного обеспечения (NRecon v.1.6.3, Bruker-microCT), обеспечивающего осевые поперечные сечения образцов.
Изображения были сегментированы с помощью программного обеспечения CTAn v.1.12 (Bruker-microCT), а реконструкция трехмерных моделей была выполнена с использованием программного обеспечения Ctvol v.2.2.1 (Bruker-microCT).
Программное обеспечение ImageJ 1.50d (Национальный институт здравоохранения, Бетесда, Мэриленд) использовалось для расчета площади поверхности (мм2) и объем (мм3) канала по всей длине канала (от рабочей длины до 10 мм короче) и в апикальном сегменте (от рабочей длины до 4 мм короче). То же программное обеспечение использовалось для оценки количества неподготовленных поверхностей корневых каналов путем вычисления количества статических вокселей, которое выражалось в процентах от общего количества вокселей на поверхности канала.
Подготовка контрактного
Микро-КТ-изображения полости доступа использовались для планирования препарирования сокращенных полостей доступа, которые состояли из небольшой круглой полости как можно ближе к режущему краю, с сохранением структуры твердых тканей в области цервикального дентина Для этого микро-КТ-изображения режущего края накладывали на изображение пульповой камеры, и расстояние от последней до мезиального и дистального аспектов измеряли с использованием ImageJ 1.50d.
Эти измерения были перенесены на режущий край образца зуба с помощью цифрового штангенциркуля ((Закаленный из нержавеющей стали; Too Xem, Нивелль, Бельгия) и помечены пилотной ручкой с тонким кончиком.
Для облегчения обработки зубы устанавливали вертикально до пришеечной области с заворачиванием корня в смоченную марлю в тиски на всех этапах лечения корневых каналов. Полости минимально инвазивного доступа были подготовлены под увеличением с помощью операционного микроскопа (DF Vasconcellos, Валенса, RJ, Бразилия) с использованием круглых 1012 HL боров (KG Sorensen, Сан-Паулу, SP, Бразилия) на высокой скорости. В другой группе полости доступа были подготовлены в соответствии с общепринятыми рекомендациями по размеру и контуру с использованием круглых боров 1014 HL и Endo-Z (Dentsply Maillefer, Ballaigues, Швейцария) на высокой скорости под операционным микроскопом.
Контаминация корневого канала
Ручной файл типа K размером 15 (FKG Dentaire, La Chaux-de-Fonds, Швейцария) помещали в корневой канал до тех пор, пока его верхушка не визуализировалась в апикальном отверстии с помощью стереомикроскопа. Этот показатель был записан как длина проходимости, и до этого момента все корневые каналы были обработаны инструментом Mtwo 10/.04. (VDW, Мюнхен, Германия) с электродвигателем VDW Silver с ограниченным крутящим моментом для стандартизации исходного диаметра корневого канала и создать место для дальнейшего загрязнения канала. Смазанный слой удаляли следующим образом корневые каналы были заполнены 17% ЭДТА (Merck, Рио-де-Жанейро, штат Р. Дж., Бразилия) с использованием иглы NaviTip 30-G (Ultradent, South Jordan, UT); зубы были полностью погружены в один и тот же раствор, а затем подвергались ультразвуковому перемешиванию в течение 3 минут.
Затем те же подходы были последовательно выполнены с использованием дистиллированной воды, 2,5% гипохлорита натрия (NaOCl) и 10% натрия. тиосульфат (Мерк).Каналы промывали дистиллированной водой и затем заполняли триптиказо-соевым бульоном (Difco, Детройт, Мичиган). Зубы полностью погружали в тот же бульон в микроцентрифужных пробирках и дважды центрифугировали при 10 000 об/мин в течение 2 минут, чтобы освободить захваченный воздух и позволить культуральной среде проникнуть в неровности корневого канала. Образцы стерилизовали в автоклаве.
Штамм Enterococcus faecalis ATCC 29 212 (Американская коллекция типовых культур, Манассас, Вирджиния) использовали для контаминации канала. Свежевыращенную в течение ночи культуру этого бактериального штамма использовали для инокуляции среды, содержащей зубы. Образцы инкубировали в течение 30 дней при 37 °C при осторожном встряхивании, а культуральную среду каждую неделю пополняли свежей.
Два зуба были зафиксированы в 10% забуференном формалине и обработаны для оценки с помощью сканирующей электронной микроскопии, чтобы подтвердить бактериальную колонизацию и образование биопленки на стенках канала, как описано ранее.
Затем те же подходы были последовательно выполнены с использованием дистиллированной воды, 2,5% гипохлорита натрия (NaOCl) и 10% натрия. тиосульфат (Мерк).Каналы промывали дистиллированной водой и затем заполняли триптиказо-соевым бульоном (Difco, Детройт, Мичиган). Зубы полностью погружали в тот же бульон в микроцентрифужных пробирках и дважды центрифугировали при 10 000 об/мин в течение 2 минут, чтобы освободить захваченный воздух и позволить культуральной среде проникнуть в неровности корневого канала. Образцы стерилизовали в автоклаве.
Штамм Enterococcus faecalis ATCC 29 212 (Американская коллекция типовых культур, Манассас, Вирджиния) использовали для контаминации канала. Свежевыращенную в течение ночи культуру этого бактериального штамма использовали для инокуляции среды, содержащей зубы. Образцы инкубировали в течение 30 дней при 37 °C при осторожном встряхивании, а культуральную среду каждую неделю пополняли свежей.
Два зуба были зафиксированы в 10% забуференном формалине и обработаны для оценки с помощью сканирующей электронной микроскопии, чтобы подтвердить бактериальную колонизацию и образование биопленки на стенках канала, как описано ранее.
Процедура взятие бактериологического образца
Апикальные отверстия всех зубов были закрыты материалом Topdam (FGM, Joinville, SC, Бразилия), чтобы предотвратить просачивание бактерий через апикальное отверстие и создать систему с закрытым концом, которая имитирует эффект паровой пробки. Перед химико-механическим препарированием коронку зуба, включая стенки пульповой камеры, и наружную поверхность корня очищали 3% водородом. перекиси и дезинфицируют 2,5% раствором NaOCl. Последний затем инактивировали 10% тиосульфатом натрия. Эту процедуру проводили стерильными ватными тампонами и стерильными бумажными штифтами, смоченными растворами. Образец для контроля стерильности (отрицательный контроль) брали с внутренних поверхностей доступа.
Полости с помощью стерильных бумажных штифтов, которые были помещены в трис-ЭДТА-буфер (10 ммоль/л Трис-HCl и 1 ммоль/л ЭДТА, рН 5−7,6), а затем обработаны и проанализированы так же, как описано для образцов корневых каналов.
Внутриканальные бактериологические пробы были взяты до (S1) и после препарирования корневого канала (S2). Корневой канал сначала промывали 1 мл стерильного 0,85% физиологического раствора для удаления непривязанных бактериальных клеток, и отбирали начальную пробу путем последовательного использования 3−5 бумажных штифтов, расположенных на расстоянии 1 мм от Длина проходимости. Эта мера была определена как рабочая длина (WL). Каждую бумажный штифт оставляли в канале на 1 минуту, удаляли и помещали в колбы, содержащие 1 мл Трис-ЭДТА-буфера. Образцы немедленно замораживали при 220 °C до извлечения ДНК и анализа qPCR.
Внутриканальные бактериологические пробы были взяты до (S1) и после препарирования корневого канала (S2). Корневой канал сначала промывали 1 мл стерильного 0,85% физиологического раствора для удаления непривязанных бактериальных клеток, и отбирали начальную пробу путем последовательного использования 3−5 бумажных штифтов, расположенных на расстоянии 1 мм от Длина проходимости. Эта мера была определена как рабочая длина (WL). Каждую бумажный штифт оставляли в канале на 1 минуту, удаляли и помещали в колбы, содержащие 1 мл Трис-ЭДТА-буфера. Образцы немедленно замораживали при 220 °C до извлечения ДНК и анализа qPCR.
Химико-механическая подготовка
Все процедуры были выполнены одним и тем же оператором, опытным эндодонтистом, который не знал внутренней анатомии, выявленной с помощью микро-КТ. Зубы были распределены на 2 группы по 30 в каждой, одну с узкими полостями доступа, другую с обычными полостями.
Препарирование проводилось одинаково во всех каналах 2-х групп с использованием инструмента XP-endo Shaper (FKG Dentaire). Первоначально канал был промыт 2 мл NaOCl в течение 30 секунд, и с помощью ручного файла типа K размером 15 была создана «ковровая дорожка» к WL. 1 Нсм в течение 10 секунд возвратно-поступательными движениями с амплитудой 3−4 мм до рабочей длины. Инструмент извлекали из канала, очищали стерильной марлей и проводили промывание 2 мл NaOCl в течение 30 секунд. Ручной файл К-типа размером 15 использовался для проверки и поддержания проходимости корневого канала при каждом извлечении инструмента XP-endo Shaper. Далее инструмент XP-endo ShaperTM использовался дважды, как описано (всего 3 цикла по 10 секунд каждый на РУ). После последнего цикла канал промывали 2 мл NaOCl в течение 30 секунд, 5 мл 17% ЭДТА в течение 30 секунд и 2 мл NaOCl в течение 30 секунд. Окончательную промывку 1 мл 10% тиосульфата натрия в течение 1 минуты выполняли для инактивации NaOCl и брали бактериологический образец S2, как описано ранее. Было выполнено новое микро-КТ сканирование.
Каждый инструмент использовался для подготовки 3 корневых каналов. Иглы NaviTip (30 г) использовались для всех процедур орошения. Иглы размещали на расстоянии 3 мм от WL. Ирригационная игла была соединена с ирригационным насосом Vatea (ReDentNOVA, Ra’anana, Израиль) для управления потоком поливной жидкости.
В обеих группах общий объем ирригатора, используемого на канал, составлял 10 мл 2,5% NaOCl и 5 мл 17% EDTA. Все процедуры проводились в строгих асептических условиях в камере ультрафиолетового стерилизатора с внутренней температурой, поддерживаемой на уровне 37 °C с помощью нагревателя (800-Heater; PlasLabs, Lansing, MI)
Все ирриганты также предварительно нагревали на водяной бане до 37 °C.
Препарирование проводилось одинаково во всех каналах 2-х групп с использованием инструмента XP-endo Shaper (FKG Dentaire). Первоначально канал был промыт 2 мл NaOCl в течение 30 секунд, и с помощью ручного файла типа K размером 15 была создана «ковровая дорожка» к WL. 1 Нсм в течение 10 секунд возвратно-поступательными движениями с амплитудой 3−4 мм до рабочей длины. Инструмент извлекали из канала, очищали стерильной марлей и проводили промывание 2 мл NaOCl в течение 30 секунд. Ручной файл К-типа размером 15 использовался для проверки и поддержания проходимости корневого канала при каждом извлечении инструмента XP-endo Shaper. Далее инструмент XP-endo ShaperTM использовался дважды, как описано (всего 3 цикла по 10 секунд каждый на РУ). После последнего цикла канал промывали 2 мл NaOCl в течение 30 секунд, 5 мл 17% ЭДТА в течение 30 секунд и 2 мл NaOCl в течение 30 секунд. Окончательную промывку 1 мл 10% тиосульфата натрия в течение 1 минуты выполняли для инактивации NaOCl и брали бактериологический образец S2, как описано ранее. Было выполнено новое микро-КТ сканирование.
Каждый инструмент использовался для подготовки 3 корневых каналов. Иглы NaviTip (30 г) использовались для всех процедур орошения. Иглы размещали на расстоянии 3 мм от WL. Ирригационная игла была соединена с ирригационным насосом Vatea (ReDentNOVA, Ra’anana, Израиль) для управления потоком поливной жидкости.
В обеих группах общий объем ирригатора, используемого на канал, составлял 10 мл 2,5% NaOCl и 5 мл 17% EDTA. Все процедуры проводились в строгих асептических условиях в камере ультрафиолетового стерилизатора с внутренней температурой, поддерживаемой на уровне 37 °C с помощью нагревателя (800-Heater; PlasLabs, Lansing, MI)
Все ирриганты также предварительно нагревали на водяной бане до 37 °C.
Молекулярно-микробиологический анализ
Мини-набор ДНК QIAamp (Qiagen, Валенсия, Калифорния) использовался для извлечения ДНК из бактериологических образцов (контроль стерильности, S1 и S2) в соответствии с протоколом, рекомендованным производителем. Общие уровни E. faecalis определяли количественно с помощью анализа qPCR на основе гена 16S рибосомной РНК с использованием специфической пары праймеров для этого вида19.
Анализ qPCR проводили с использованием Power SYBR Green PCR Master Mix (Thermo Fisher Scientific, Фостер-Сити, Калифорния) на приборе для ПЦР в реальном времени ABI 7500 (Thermo Fisher Scientific) в общем реакционном объеме 20 мл, содержащем каждый праймер в концентрации 0,5 ммоль/л и 2 мл Извлечение ДНК из каждого образца.
Реакция qPCR была такой, как описано ранее 20. Вкратце, условия циклирования температуры включали начальный этап при 95 °C в течение 10 минут, за которым следовали 40 циклов при 95 °C в течение 1 минуты, 60 °C в течение 1 минуты и 72 °C в течение 1 минуты. Накопление продуктов полимеразной цепной реакции измеряли в каждом цикле.
Отрицательный контроль, не содержащий ДНК-матрицы, подвергали тем же процедурам. Оценки проводились в трех экземплярах для образцов, стандартов и контрольных образцов.
Анализ кривой плавления продуктов полимеразной цепной реакции проводили после амплификации для подтверждения специфичности метода.
Сбор и анализ данных проводились с использованием программного обеспечения ABI 7500 версии v2.0.4 (Applied Biosystems, Фостер-Сити, Калифорния). E. количество фекалий определяли на основе стандартной кривой, построенной с использованием экстрактов ДНК из известных концентраций E. faecalis ATCC 29 212, которые были 10-кратно разведены от 107 до 102 клеток в буфере Трис-ЭДТА и использованы для построения кривой.
Анализ qPCR проводили с использованием Power SYBR Green PCR Master Mix (Thermo Fisher Scientific, Фостер-Сити, Калифорния) на приборе для ПЦР в реальном времени ABI 7500 (Thermo Fisher Scientific) в общем реакционном объеме 20 мл, содержащем каждый праймер в концентрации 0,5 ммоль/л и 2 мл Извлечение ДНК из каждого образца.
Реакция qPCR была такой, как описано ранее 20. Вкратце, условия циклирования температуры включали начальный этап при 95 °C в течение 10 минут, за которым следовали 40 циклов при 95 °C в течение 1 минуты, 60 °C в течение 1 минуты и 72 °C в течение 1 минуты. Накопление продуктов полимеразной цепной реакции измеряли в каждом цикле.
Отрицательный контроль, не содержащий ДНК-матрицы, подвергали тем же процедурам. Оценки проводились в трех экземплярах для образцов, стандартов и контрольных образцов.
Анализ кривой плавления продуктов полимеразной цепной реакции проводили после амплификации для подтверждения специфичности метода.
Сбор и анализ данных проводились с использованием программного обеспечения ABI 7500 версии v2.0.4 (Applied Biosystems, Фостер-Сити, Калифорния). E. количество фекалий определяли на основе стандартной кривой, построенной с использованием экстрактов ДНК из известных концентраций E. faecalis ATCC 29 212, которые были 10-кратно разведены от 107 до 102 клеток в буфере Трис-ЭДТА и использованы для построения кривой.
Статистический анализ
Бактериологические образцы были взяты из 2 групп в 2 временных точках.
Многоуровневые регрессионные модели Пуассона были приспособлены к данным подсчета бактерий, чтобы учесть чрезмерную дисперсию данных и тот факт, что эти данные были сгруппированы на индивидуальном уровне. Коэффициенты заболеваемости были получены из моделей и описывали внутригрупповые и межгрупповые изменения количества бактерий после лечения. Анализы проводились в программном обеспечении StataSE 15 (StataCorp, Station College, TX).
Данные по бактериальному наличию/отсутствию после лечения сравнивали с помощью критерия хи-квадрат с коррекцией Йейтса с использованием программного обеспечения STATISTICA v8.0 (StatSoft, Tulsa, OK).
Для микро-КТ-анализа неподготовленных участков поверхности нормальность количественных переменных была проверена с помощью теста Колмогорова-Смирнова и графического анализа.
Для внутри- и межгрупповых сравнений, связанных с общей длиной корневого канала (10 мм), t-критерий Стьюдента был применен к данным об объеме и поверхности корневого канала (исходной и конечной), а также к количеству не препарированных участков.
Когда апикальный 4-мм сегмент канала оценивался отдельно, для межгруппового анализа использовался непараметрический критерий Манна-Уитни, а для внутригруппового анализа — критерий Уилкоксона. Программное обеспечение SPSS (Statistical Package for Social Sciences 21.0; IBMt Corp, Armonk, NY) использовалось для анализа данных микро-КТ с уровнем значимости, установленным на уровне 5%.
Многоуровневые регрессионные модели Пуассона были приспособлены к данным подсчета бактерий, чтобы учесть чрезмерную дисперсию данных и тот факт, что эти данные были сгруппированы на индивидуальном уровне. Коэффициенты заболеваемости были получены из моделей и описывали внутригрупповые и межгрупповые изменения количества бактерий после лечения. Анализы проводились в программном обеспечении StataSE 15 (StataCorp, Station College, TX).
Данные по бактериальному наличию/отсутствию после лечения сравнивали с помощью критерия хи-квадрат с коррекцией Йейтса с использованием программного обеспечения STATISTICA v8.0 (StatSoft, Tulsa, OK).
Для микро-КТ-анализа неподготовленных участков поверхности нормальность количественных переменных была проверена с помощью теста Колмогорова-Смирнова и графического анализа.
Для внутри- и межгрупповых сравнений, связанных с общей длиной корневого канала (10 мм), t-критерий Стьюдента был применен к данным об объеме и поверхности корневого канала (исходной и конечной), а также к количеству не препарированных участков.
Когда апикальный 4-мм сегмент канала оценивался отдельно, для межгруппового анализа использовался непараметрический критерий Манна-Уитни, а для внутригруппового анализа — критерий Уилкоксона. Программное обеспечение SPSS (Statistical Package for Social Sciences 21.0; IBMt Corp, Armonk, NY) использовалось для анализа данных микро-КТ с уровнем значимости, установленным на уровне 5%.
Полученные результаты
Результаты дезинфекции
Три зуба были исключены из исследования в связи с тем, что они разрушились при стерилизации в автоклаве (2 зуба) или имели положительный результат. стерильный был (1 зуб). Все образцы контроля стерильности для других зубов были отрицательными, а все образцы S1 из тех же зубов были положительными на E. faecalis. Количество образцов с положительным результатом на бактерии в S2 составило 25 из 29 (86%) в группе с консервативным эндодонтическим доступом и 14 из 28 (50%) в группе с обычными полостями (P, 0,01).
Внутригрупповой количественный анализ показал значительное среднее снижение количества бактерий от S1 до S2 на 98% и 99% в группах со консервативным и обычными доступами, соответственно (P < 0,01) (таблица 1). не было значительных различиb в количестве S1 между группами (P. . 05). Межгрупповые количественные сравнения образцов S2 показали, что количество бактерий в группе обычным доступом было на 82% ниже, чем в группе с консервативным доступом (P, 0,01) (таблица 1).
Три зуба были исключены из исследования в связи с тем, что они разрушились при стерилизации в автоклаве (2 зуба) или имели положительный результат. стерильный был (1 зуб). Все образцы контроля стерильности для других зубов были отрицательными, а все образцы S1 из тех же зубов были положительными на E. faecalis. Количество образцов с положительным результатом на бактерии в S2 составило 25 из 29 (86%) в группе с консервативным эндодонтическим доступом и 14 из 28 (50%) в группе с обычными полостями (P, 0,01).
Внутригрупповой количественный анализ показал значительное среднее снижение количества бактерий от S1 до S2 на 98% и 99% в группах со консервативным и обычными доступами, соответственно (P < 0,01) (таблица 1). не было значительных различиb в количестве S1 между группами (P. . 05). Межгрупповые количественные сравнения образцов S2 показали, что количество бактерий в группе обычным доступом было на 82% ниже, чем в группе с консервативным доступом (P, 0,01) (таблица 1).
ТАБЛИЦА 1. Молекулярно-микробиологические данные о количестве внутриканальных бактерий до (S1) и после препарирования с помощью XP-endo Shaper (S2) в зубах с консервативным или обычными эндодонтическим доступом.
Формирование Результатов
В таблице 2 представлены средние, медианные и диапазонные значения объема и площади поверхности всей длины канала (10 мм) и апикальной части (4 мм) овальных корневых каналов до и после препарирования с помощью формирователя XP-endo в обеих оцененных группах. Не наблюдалось статистически значимых различий в исходном объеме и площади поверхности корневых каналов показано, что распределение выборки между группами было однородным.
Внутригрупповой анализ выявил статистически значимые различия в объеме и площади поверхности после препарирования канала с помощью формирователя XP-endo (P, 0,05).
Межгрупповые сравнения не показали существенной разницы в количестве неподготовленных участков между группами сокращенных и обычных эндодонтических полостей как по всей длине канала, так в 4 мм апикальной части зуба (фиг. 1A-D).,
В таблице 2 представлены средние, медианные и диапазонные значения объема и площади поверхности всей длины канала (10 мм) и апикальной части (4 мм) овальных корневых каналов до и после препарирования с помощью формирователя XP-endo в обеих оцененных группах. Не наблюдалось статистически значимых различий в исходном объеме и площади поверхности корневых каналов показано, что распределение выборки между группами было однородным.
Внутригрупповой анализ выявил статистически значимые различия в объеме и площади поверхности после препарирования канала с помощью формирователя XP-endo (P, 0,05).
Межгрупповые сравнения не показали существенной разницы в количестве неподготовленных участков между группами сокращенных и обычных эндодонтических полостей как по всей длине канала, так в 4 мм апикальной части зуба (фиг. 1A-D).,
Обсуждение
В этом исследовании ex vivo оценивалось влияние суженных эндодонтических полостей на уменьшение количества бактерий (дезинфекция) и количество неподготовленных поверхностей стенок (формирование) в овальных каналах резцов нижней челюсти по сравнению с обычными полостями.
Формование и дезинфекцию оценивали с помощью анализов микро-КТ и количественной ПЦР соответственно.
Результаты показали, что, хотя форма корневого канала существенно не пострадала, внутриканальная дезинфекция была нарушена в группе с консервативным доступом.
Внутригрупповой количественный анализ, оценивающий дезинфекцию корневых каналов, показал, что оба протокола лечения способствовали значительному снижению внутриканального бактериального загрязнения.
Эти данные подтверждают важную роль химико-механических процедур в дезинфекции корневых каналов.
Тем не менее, во многих каналах после препарирования все еще обнаруживались бактерии. Эти остаточные бактерии могли находиться в необработанных местах, включая углубления овальных каналов.
Поскольку остаточные бактерии могут поставить под угрозу исход лечения необходимо разработать стратегии улучшения дезинфекции во время или после химико-механического препарирования овальных и нестандартных корневых каналов.
Межгрупповые сравнения образцов S2 показали, что лечение с использованием обычных полостей доступа способствовало дезинфекции лучше, чем в группе с малоинвазивным доступом к полостям.
Это наблюдалось как для снижения количества бактерий, так и для числа случаев, отрицательных на присутствие бактерий. Микробиологические исследования рассматривались как суррогатная конечная точка для исследований результатов, а в недавнем исследовании сообщалось о лучшем прогнозе, когда результаты количественной ПЦР были отрицательными в отношении присутствия бактерий или приводили к низкому количеству бактерий во время пломбирования.
Настоящие результаты показывают, что размер и конструкция полости доступа могут влиять на дезинфекцию корневых каналов.
Консервативный доступ может помешать работе инструмента XP-endo Shaper. Этот инструмент работает змеевидными движениями, затрагивая большее количество областей, что, вероятно, может улучшить отделение бактериальных биопленок от стенок канала.
Показано, что консервативный доступ к полостям отрицательно влияет на угол входа инструмента в канал и может ограничил движение XP-endo Shaper.
Тем не менее, поскольку микро-КТ не выявила существенных различий в количестве не препарированных областей между группами, также возможно, что лучшее вымывание ирриганта происходит в зубах с обычным доступом.
Также существует вероятность того, что инструмент XP-endo Shaper мог касаться большего количества стенок в группе обычных полостей, не обязательно расширяя канал (и, следовательно, не отображаясь на микро-КТ).
Этого могло быть достаточно для отделения биопленок и улучшения бактериального снижение. Эти домыслы нуждаются в уточнении.
Результаты показали, что, хотя форма корневого канала существенно не пострадала, внутриканальная дезинфекция была нарушена в группе с консервативным доступом.
Внутригрупповой количественный анализ, оценивающий дезинфекцию корневых каналов, показал, что оба протокола лечения способствовали значительному снижению внутриканального бактериального загрязнения.
Эти данные подтверждают важную роль химико-механических процедур в дезинфекции корневых каналов.
Тем не менее, во многих каналах после препарирования все еще обнаруживались бактерии. Эти остаточные бактерии могли находиться в необработанных местах, включая углубления овальных каналов.
Поскольку остаточные бактерии могут поставить под угрозу исход лечения необходимо разработать стратегии улучшения дезинфекции во время или после химико-механического препарирования овальных и нестандартных корневых каналов.
Межгрупповые сравнения образцов S2 показали, что лечение с использованием обычных полостей доступа способствовало дезинфекции лучше, чем в группе с малоинвазивным доступом к полостям.
Это наблюдалось как для снижения количества бактерий, так и для числа случаев, отрицательных на присутствие бактерий. Микробиологические исследования рассматривались как суррогатная конечная точка для исследований результатов, а в недавнем исследовании сообщалось о лучшем прогнозе, когда результаты количественной ПЦР были отрицательными в отношении присутствия бактерий или приводили к низкому количеству бактерий во время пломбирования.
Настоящие результаты показывают, что размер и конструкция полости доступа могут влиять на дезинфекцию корневых каналов.
Консервативный доступ может помешать работе инструмента XP-endo Shaper. Этот инструмент работает змеевидными движениями, затрагивая большее количество областей, что, вероятно, может улучшить отделение бактериальных биопленок от стенок канала.
Показано, что консервативный доступ к полостям отрицательно влияет на угол входа инструмента в канал и может ограничил движение XP-endo Shaper.
Тем не менее, поскольку микро-КТ не выявила существенных различий в количестве не препарированных областей между группами, также возможно, что лучшее вымывание ирриганта происходит в зубах с обычным доступом.
Также существует вероятность того, что инструмент XP-endo Shaper мог касаться большего количества стенок в группе обычных полостей, не обязательно расширяя канал (и, следовательно, не отображаясь на микро-КТ).
Этого могло быть достаточно для отделения биопленок и улучшения бактериального снижение. Эти домыслы нуждаются в уточнении.
РИСУНОК 1. Репрезентативные трехмерные модели резцов нижней челюсти со суженными полостями и полостями обычного доступа. (A и B) Сканирование было сделано до (зеленый) и после препарирования корневого канала (красный) с помощью XP-endo Shaper. Области зеленого цвета на наложенных изображениях (B и C) соответствуют необработанным областям. (D) Репрезентативные 3-мерные модели полостей доступа.
Микро-КТ были сделаны в то же время, что и бактериологические образцы (т. е. до подготовки [скан 1] и после обработки XP-endo Shaper, 30/0,04 [скан 2]).
После препарирования с помощью XP-endo Shaper в обеих группах не наблюдалось статистически значимой разницы, что свидетельствует о том, что размер полости доступа не влиял на формирование канала при использовании этого регулируемого инструмента. Эти результаты согласуются с исследованиями с использованием других инструментов. Тем не менее, было показано, что минимально инвазивный доступ к полостям моляров нижней челюсти может поставить под угрозу эффективность формования обычными инструментами при препарировании дистальных каналов.
Разница в результатах могла быть вызвана типом оцениваемых инструментов и зубов.
Кроме того, бактериологические результаты настоящего исследования показали усиленную элиминацию бактерий в зубах с обычными препаратами для доступа. Таким образом, хотя тип эндодонтической полости не влиял на количество стенок, препарированных инструментом XP-endo Shaper, значительное влияние оказывалось на снижение количества бактерий.
Консервативный доступ был проведен в резцовой области зубов в соответствии с рекомендациями Boveda и Kishen 28 для сохранения дентина цингулума и максимально возможного количества дентина.
XP-endo Shaper использовался для препарирования каналов во всех группах, потому что это один из недавно представленных инструментов, который может подстраиваться под исходную анатомию корневого канала и не требует преобразования некруглого канала в круглый. Этот инструмент был разработан для улучшения придания формы, очистки и дезинфекции из-за его змеевидной формы и способности расширяться и сжиматься внутри корневого канала при температуре тела.
Поскольку инструмент XP-endo Shaper был разработан так, чтобы касаться большего количества стенок, чем обычные инструменты, без чрезмерного удаления структуры дентина, он может быть показан для минимально инвазивного лечения.
Консервативный доступ был выполнен в резцовой области зубов в соответствии с рекомендациями Boveda и Kishen 28 для сохранения цервикального дентина и максимально возможного количества дентина.
В этом исследовании образцы были сопоставлены попарно на основе анатомической конфигурации и общего объема корневого канала, оцененного с помощью микро-КТ.
Отсутствие значительных статистических различий в отношении объема и начальной площади корневых каналов между группами показало, что образец был однородным, что устраняло потенциальные анатомические отклонения, которые могли повлиять на результаты.
Одним из ограничений этого исследования было то, что бактериологический отбор производился бумажными штифтами. Этот подход позволяет оценить только бактериологическое состояние основного канала и не может определить точное местонахождение остаточных бактерий. Для преодоления этих ограничений была предложена криопульверизация образцов корней, но из-за ее разрушительного характера она не может быть реализована.
В заключение, результаты настоящего исследования показали, что дезинфекция была значительно нарушена после препарирования корневых каналов зубов со суженными эндодонтическими полостями. Поскольку заживление апикального периодонтита зависит от эффективного инфекционного контроля, чрезмерное сохранение дентина может отрицательно сказаться на результатах лечения инфицированных зубов.
После препарирования с помощью XP-endo Shaper в обеих группах не наблюдалось статистически значимой разницы, что свидетельствует о том, что размер полости доступа не влиял на формирование канала при использовании этого регулируемого инструмента. Эти результаты согласуются с исследованиями с использованием других инструментов. Тем не менее, было показано, что минимально инвазивный доступ к полостям моляров нижней челюсти может поставить под угрозу эффективность формования обычными инструментами при препарировании дистальных каналов.
Разница в результатах могла быть вызвана типом оцениваемых инструментов и зубов.
Кроме того, бактериологические результаты настоящего исследования показали усиленную элиминацию бактерий в зубах с обычными препаратами для доступа. Таким образом, хотя тип эндодонтической полости не влиял на количество стенок, препарированных инструментом XP-endo Shaper, значительное влияние оказывалось на снижение количества бактерий.
Консервативный доступ был проведен в резцовой области зубов в соответствии с рекомендациями Boveda и Kishen 28 для сохранения дентина цингулума и максимально возможного количества дентина.
XP-endo Shaper использовался для препарирования каналов во всех группах, потому что это один из недавно представленных инструментов, который может подстраиваться под исходную анатомию корневого канала и не требует преобразования некруглого канала в круглый. Этот инструмент был разработан для улучшения придания формы, очистки и дезинфекции из-за его змеевидной формы и способности расширяться и сжиматься внутри корневого канала при температуре тела.
Поскольку инструмент XP-endo Shaper был разработан так, чтобы касаться большего количества стенок, чем обычные инструменты, без чрезмерного удаления структуры дентина, он может быть показан для минимально инвазивного лечения.
Консервативный доступ был выполнен в резцовой области зубов в соответствии с рекомендациями Boveda и Kishen 28 для сохранения цервикального дентина и максимально возможного количества дентина.
В этом исследовании образцы были сопоставлены попарно на основе анатомической конфигурации и общего объема корневого канала, оцененного с помощью микро-КТ.
Отсутствие значительных статистических различий в отношении объема и начальной площади корневых каналов между группами показало, что образец был однородным, что устраняло потенциальные анатомические отклонения, которые могли повлиять на результаты.
Одним из ограничений этого исследования было то, что бактериологический отбор производился бумажными штифтами. Этот подход позволяет оценить только бактериологическое состояние основного канала и не может определить точное местонахождение остаточных бактерий. Для преодоления этих ограничений была предложена криопульверизация образцов корней, но из-за ее разрушительного характера она не может быть реализована.
В заключение, результаты настоящего исследования показали, что дезинфекция была значительно нарушена после препарирования корневых каналов зубов со суженными эндодонтическими полостями. Поскольку заживление апикального периодонтита зависит от эффективного инфекционного контроля, чрезмерное сохранение дентина может отрицательно сказаться на результатах лечения инфицированных зубов.